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        人基質金屬蛋白酶7(MMP-7)ELISA試劑盒的操作步驟
        點擊次數:164      發布時間:2022-09-19

        人基質金屬蛋白酶7(MMP-7)ELISA試劑盒的操作步驟

        背景[1-3]

        人基質金屬蛋白酶7(MMP-7)ELISA試劑盒采用夾心法酶聯免疫吸附法,用于體外定量分析人血清、血漿、細胞裂解液、唾液、尿液或細胞培養上清中MMP-7的含量。


        檢測原理:預先包被的抗體和檢測相抗體都是親和純化級的MMP-7多克隆抗體。檢測抗體經生物素標記。樣品和生物素標記抗體先后加入酶標板孔反應后,PBS或TBS洗滌。隨后加入過氧化物酶標記的親和素反應;經過PBS或TBS的徹底洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的MMP-7呈正相關。


        人基質金屬蛋白酶7(MMP-7)ELISA試劑盒

        基質金屬蛋白酶是依賴鋅和鈣的內肽酶,能夠降解細胞外基質的所有成分。它們在許多生理過程中發揮重要作用,如胚胎發育、組織成型、復制、再生等。它們參與很多病理過程如關節炎、癌癥、心血管疾病。新合成MMPs的量主要由復制水平控制。MMPs的活性主要由酶原的活化和其抑制蛋白質(TIMPs)所調節。MMP-7由正常和疾病組織的上皮細胞分泌。MMP-7可降解一系列基質如Ⅳ型膠原,明膠,彈性蛋白和層聯蛋白。MMP-7還能激活UPA和前MMP-1,2,9。本試劑盒所用標準品為重組人MMP-7,包含250個氨基酸,分子量28KDa。所檢測MMP-7包括酶原和活性酶。


        操作步驟

        1.標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照隨貨說明書中圖表在小試管中進行稀釋。

        2.加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

        3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

        4.配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

        5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。

        6.加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。

        7.溫育:操作同3。

        8.洗滌:操作同5。

        9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10分鐘.

        10.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。

        11.測定:以空白孔調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應在加終止液后15分鐘以內進行。


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